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El Museo está situado en la Iglesia de Santa María, antiguo cabildo de las numerosas parroquias de Peñafiel, (llegó a tener hasta 13). La iglesia muestra elementos de casi todos los estilos artísticos: el entramado gótico de sus naves, la pulcritud renacentista de pórtico y coro, así como el barroco, evidente en sus numerosos retablos y en su ábside. Desde 1998 esta iglesia comparte protagonismo con una de las más refinadas colecciones de arte religioso de la comarca. Retablos, esculturas, fina orfebrería y exquisitos lienzos son tan sólo una referencia de las valiosas muestras del patrimonio cultural que Peñafiel custodia.

Cuenta con una de las colecciones más importantes de orfebrería de Castilla y León.